免疫細胞的精細化分型一直受到諸多領(lǐng)域眾多專家的關(guān)注與重視，日前《中華預(yù)防醫(yī)學(xué)》隆重發(fā)布《基于多參數(shù)流式細胞術(shù)精細化分析外周血免疫細胞亞群的中國專家共識》，再次將免疫細胞精細化分析推向“焦點”！該共識綜合分析了中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會檢驗醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會的92位專家所在醫(yī)療機構(gòu)（大多數(shù)已使用或者部分使用多參數(shù)流式細胞術(shù)進行精細化分析外周血免疫細胞亞群）對“基于多參數(shù)流式細胞術(shù)精細化分析外周血免疫細胞亞群”的反饋意見和納入的文獻。多參數(shù)流式細胞術(shù)是檢測免疫細胞精細化亞群、進行免疫功能評價的重要技術(shù)方法，由于增加了更多參數(shù)，獲得更多細胞亞群信息，因此不僅可以在篩查淋巴瘤[1-3]和腫瘤前驅(qū)病變（包括癌前病變和癌前狀態(tài)）[4-5]以及部分遺傳和免疫缺陷性疾病診斷[6-8]中發(fā)揮一定作用，還可發(fā)現(xiàn)很多良惡性疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后與免疫細胞亞群有關(guān)[9-16]，在免疫治療[17]和造血干細胞移[18]等特殊治療后免疫重建中，偏離規(guī)律性的精細化免疫細胞亞群變化可能與疾病預(yù)后以及并發(fā)癥有關(guān)。為規(guī)范外周血免疫細胞亞群的流式細胞術(shù)精細化檢測方法和方案，進一步促進其在臨床疾病診療和健康管理中的應(yīng)用，中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會檢驗醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會組織專家制定了此專家共識[19]，該共識包含15條，不僅是基于免疫細胞精細化分型的精心之作，也是免疫細胞精細化分型廣泛應(yīng)用于臨床的重要依據(jù)。共識首先指出，強烈建議在基礎(chǔ)的淋巴細胞亞群檢測的基礎(chǔ)上增加分化發(fā)育、功能性和活化相關(guān)標志物，根據(jù)臨床需求選擇不同組合的免疫細胞亞群精細化分析，如CD25/CD127、CD28等；第二，建議進行多樣性、多表型免疫細胞檢測，說明精細化分型免疫學(xué)標志組合與亞群定義；第三，強烈建議多管8色檢測方案，精細化亞群比例分別為占上一層級亞群的比例。多管8色中，包括TBNK絕對計數(shù)管、T細胞管、B細胞管、TCR管、Treg/Th管和DC/NK/單核管，基礎(chǔ)的TBNK絕對計數(shù)需要按照國家指南做好質(zhì)控，其他5管精細化分型可以只報百分比，如果精細化分型報絕對計數(shù)，需要根據(jù)細胞亞群的特點增加細胞獲取數(shù)和樣本量；第四，強烈建議使用參考區(qū)間或者參考范圍作為術(shù)語，建議進行精細化免疫細胞亞群分析獲得健康人參考區(qū)間[19]。
在傳統(tǒng)的簡單淋巴細胞亞群檢測基礎(chǔ)上，增加分化發(fā)育、功能性和活化相關(guān)標志物，根據(jù)臨床應(yīng)用需求選擇不同組合的免疫細胞亞群精細化分析。根據(jù)臨床應(yīng)用需求選擇相應(yīng)的標志物進行不同組合的T細胞相關(guān)檢測。最低檢測要求：淋巴細胞占有核細胞比例與絕對數(shù)，T細胞（包括總T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞）、B細胞、NK細胞占淋巴細胞比例和絕對數(shù)；建議增加標志提供Treg細胞比例、活化和功能性T細胞比例等免疫細胞亞群分析指標。抗原組合及方案見表1和表2。
推薦強度：強烈建議。
關(guān)于精細化分析 T 細胞亞群的免疫學(xué)標志組合與亞群定義，建議采用CD3+CD4+CD25+CD127lo/-檢測Treg，CD45RA/CD197將 T 細胞亞群區(qū)分為TN、TCM、TEM、TEMRA，使用 CD38/HLA-DR 區(qū)分單陽性或雙陽性活化的各亞群 T 細胞，可選擇性加入CD183/CD196將Th亞群分為CD183+CD196-、CD183-CD196-、CD183-CD196+三個亞群等。
推薦強度：強烈建議。
根據(jù)臨床應(yīng)用需求選擇B細胞亞群相關(guān)檢測標志。建議精細化分析免疫細胞亞群納入CD27、CD24、CD38，酌情納入kappa、lambda、CD5。建議的檢測抗原及方案見表1和表2。基礎(chǔ)免疫細胞功能分析極少關(guān)注NK細胞、單核細胞、DC的亞群區(qū)分。精細化分析免疫細胞亞群可以逐次增加標志組合，根據(jù)CD16與CD56的表達區(qū)分NK細胞亞群，系別陰性（CD3-CD19-CD56-）細胞群分別使用HLA-DR+CD14+/lo和HLA-DR+CD14-識別單核細胞和DC細胞群（需要注意的是存在天然免疫抑制/低下的患者，單核細胞以及DC的HLA-DR的表達可降低），進一步使用CD16和CD14對單核細胞進行分群，CD123和CD11c對DC進行分群。
目前MDSC的研究主要用于某些良惡性疾病相關(guān)的特殊免疫細胞亞群研究，在一般的基礎(chǔ)和精細化分析免疫細胞亞群中均不主張納入，其他免疫細胞群也主要用于疾病治療相關(guān)的特殊免疫細胞檢測，方案也隨著研究和應(yīng)用需求而有所不同。特殊疾病和健康管理相關(guān)的特殊免疫細胞亞群，根據(jù)疾病特點以及檢測目的選擇相應(yīng)組合進行篩查。因為絕對計數(shù)和精細化亞群分析存在操作的差異性，所以建議分管進行。絕對計數(shù)管僅做基礎(chǔ)的總T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞、B細胞、NK細胞的比例和絕對計數(shù)，可以采用單平臺和雙平臺方法，操作與分析的技術(shù)要點和質(zhì)量控制見國家指南。精細化分析免疫細胞亞群建議由8色MFC管完成，其精細化程度與方案根據(jù)臨床應(yīng)用需求選擇?？梢圆捎枚喙?色及以上方案或一管超多色方法，精細化亞群比例分別為占上一層級亞群的比例。共識建議的8色多管組合方案見表2，使用其他 MFC檢測技術(shù)平臺時可參照該方案調(diào)整確定。數(shù)據(jù)分析時使用Diva、flowjo、kaluza及其他類似功能的軟件均可。建議分析的T細胞、B細胞、NK細胞、DC、單核細胞、粒細胞以及各亞群的免疫表型定義以及方案見表1和表2。免疫細胞亞群檢測結(jié)果判定參照物的術(shù)語，建議使用參考區(qū)間或者參考范圍而非正常值。為了達到通過免疫功能檢測前瞻性預(yù)警與篩查的目的，建議進行精細化免疫細胞亞群分析獲得popRI；以popRI作為參照，相關(guān)指南共識為依據(jù)，對個體的檢測結(jié)果進行解讀，給臨床診療和健康管理提供輔助診斷信息或者進一步檢測的建議。疾病發(fā)展和治療有規(guī)律性過程，為了預(yù)警疾病進展、發(fā)現(xiàn)并發(fā)癥，建議建立合理的治療和疾病恢復(fù)期監(jiān)測時間點和無并發(fā)癥患者中反映免疫細胞恢復(fù)的RCV。建議將部分認識較成熟的免疫衰老（如CD57等）、免疫耗竭（如PD1等）相關(guān)指標納入精細化免疫細胞亞群；將popRI進行年齡段的細分，甚至做逐年變化曲線，并定期修訂。健康管理的地位日益重要，免疫功能檢測應(yīng)該賦予一定的早期篩查淋巴瘤和腫瘤前驅(qū)病變的作用，以及為一些淋巴細胞克隆性指標建立popRI，建議逐步將kappa/lambda和TRBC1、TCRVδ1和/或TCRVδ2納入精細化免疫細胞亞群檢測。
從該版中國專家共識可以看出，“精細化分析”及“多參數(shù)”十分關(guān)鍵，傳統(tǒng)的免疫細胞檢測和功能評估過于簡單，局限于檢測T、B、NK細胞的比例及絕對數(shù)，反映免疫細胞的信息不夠全面、立體，精細化分析外周血免疫細胞亞群增加了調(diào)節(jié)性T細胞（regulatory T cell，Treg）、樹突狀細胞（dendritic cells，DC）等各類免疫細胞，以及檢測其分化發(fā)育、功能性和活化狀態(tài)相關(guān)標志物，更加精準地描述免疫細胞所處的階段和相關(guān)的細胞功能，為臨床提供更多可選擇信息。
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